W tym przypadku ustanawiamy sCRAM (suboptymalny motyw przylegający do protoprzerywnika (PAM)-za pośrednictwem CRISPR RNA i nukleazy Cas12a w połączeniu z wieloenzymatyczną izotermiczną szybką amplifikacją), szybką i niewymagającą ekstrakcji-platformę diagnostyczną, która wykrywa ASFV w ciągu 20 minut. sCRAM łączy etap szybkiego uwalniania kwasu nukleinowego (40 stopni, 5 min) z reakcją w jednej-probówce, łączącą amplifikację izotermiczną wielu enzymów (MIRA) i suboptymalny CRISPR/-za pośrednictwem PAM
System Cas12a (37 stopni, 15 min), umożliwiający-swobodny odczyt wizualny przy użyciu przyrządu za pomocą światła UV lub pasków przepływu bocznego (LFS).sCRAM wykazuje czułość wykrywania pojedynczych-kopii i nie wykazuje-reaktywności krzyżowej z pięcioma powszechnymi patogenami świń (PRRSV, PPV, JEV, PCV i PRV). Ocena 111 próbek symulowanych i klinicznych (w tym krwi, osocza i wymazów) wykazała 100% zgodność z metodą qPCR w przypadku odczytu UV i 98,20% w przypadku LFS
odczytu, przy czym obie metody wykazują 100% swoistość. Prostota, szybkość i możliwość adaptacji w terenie sCRAM podkreślają jego potencjał w zakresie zdecentralizowanego nadzoru ASFV w ustawieniach-o ograniczonych zasobach, oferując potężne narzędzie do powstrzymywania epidemii.
W tym badaniu opracowaliśmy sCRAM, szybką-możliwą do wdrożenia w terenie platformę do wykrywania ASFV, integrującą suboptymalny CRISPR/Cas12a-za pośrednictwem PAM z wieloenzymatyczną amplifikacją izotermiczną. Test osiąga czułość na pojedynczą-kopię 1 kopię/uL w ciągu 20 minut i nie wykazuje{{7}reaktywności krzyżowej z głównymi patogenami świń. Walidacja kliniczna próbek krwi, osocza i wymazów wykazała pełną zgodność z metodą qPCR z odczytem w świetle UV i dokładnością na poziomie 98,20% przy użyciu pasków przepływu bocznego. Dzięki uproszczonej obsłudze, wysokiej czułości i swoistości oraz wizualnej interpretacji wyników, sCRAM oferuje duży potencjał w zakresie-nadzoru ASFV na miejscu i szerszych zastosowań diagnostycznych-w miejscu-opieki.
